Substratlar
Otoantikorların varlığını belirlemek için çeşitli substratlar kullanıldı. Şu anda insan laringeal skuamöz hücreli karsinom (HEp-0) hücreleri mevcuttur.
Bunlar, daha önce kullanılan doku kesitlerinin aksine, normal epitel hücrelerinden daha büyük çekirdek ve çekirdekçiklere sahip olmaları ve hücre dışı matris olmadan tek katman halinde düzenlenmiş olmaları nedeniyle seçilmiştir; bu da görselleştirmeyi iyileştirir. IFA'da antijenler (Ag'ler) doğal formlarındadır, bu nedenle yüksek hassasiyete sahiptirler ve HEp-0 hücreleri insan hücrelerinden türetildiği için hassasiyet de artar.